Mediomics Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸說明書

Bridge-It ® S-Adenosyl Methionine (SAM)

Fluorescence Assay

Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸（SAM）

熒光分析

（96孔微孔板格式）

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Bridge It®S-腺苷蛋氨酸（SAM）熒光檢測(cè)試劑盒僅用于實(shí)驗(yàn)室研究和開發(fā)（R&D）。本產(chǎn)品未獲得政府監(jiān)管部門批準(zhǔn)用于診斷或治療人類或動(dòng)物疾病、監(jiān)測(cè)食品或?qū)嶒?yàn)室研發(fā)以外的任何應(yīng)用，不得用于此類目的。

S-腺苷甲硫氨酸（也稱為SAM、SAMe或AdoMet）在所有類型生物的甲基化生物過程中起著關(guān)鍵作用。在甲基化循環(huán)中，SAM充當(dāng)用于DNA和蛋白質(zhì)共價(jià)修飾的甲基基團(tuán)的供體。SAM水平的變異性與衰老過程、許多神經(jīng)和精神疾病，包括阿爾茨海默病、抑郁癥、HIV相關(guān)

神經(jīng)功能障礙/癡呆、多發(fā)性硬化、帕金森病、脊髓變性、癲癇、纖維肌痛、偏頭痛，以及慢性肝功能障礙、動(dòng)脈硬化和癌癥。目前，使用高壓液相色譜法（HPLC）對(duì)SAM進(jìn)行定量。高效液相色譜法耗時(shí)、成本高，而且由于需要大量有機(jī)溶劑，對(duì)環(huán)境不友好。

所有序列特異性DNA結(jié)合蛋白的共同特性是它們能夠以高親和力和特異性結(jié)合到含有核苷酸序列的DNA雙鏈-即蛋白質(zhì)的DNA結(jié)合位點(diǎn)。Mediomics的新型分析平臺(tái)設(shè)計(jì)依賴于這一共同特征。包含給定靶DNA結(jié)合蛋白的序列特異性DNA結(jié)合位點(diǎn)的DNA雙鏈體被分成兩個(gè)DNA“半位點(diǎn)"雙鏈體，每個(gè)雙鏈體具有短的單鏈上臂。這些單鏈延伸足夠短，使得在沒有靶蛋白的情況下很少發(fā)生自發(fā)的重新結(jié)合。

然而，當(dāng)靶蛋白存在時(shí)，其對(duì)全長(zhǎng)DNA序列的高親和力將驅(qū)動(dòng)兩個(gè)半位點(diǎn)DNA雙鏈體的重新結(jié)合。通過將適當(dāng)?shù)臒晒馓结樈Y(jié)合到兩個(gè)DNA半位點(diǎn)的每一個(gè)中，可以敏感地檢測(cè)這種重新結(jié)合。DNA結(jié)合蛋白的存在被檢測(cè)為熒光信號(hào)的增加。如下圖所示，該基本平臺(tái)設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)單變化允許DNA結(jié)合蛋白（黃色橢圓形）作為其特定配體的敏感生物傳感器：

真核細(xì)胞含有約3000個(gè)序列特異性DNA結(jié)合蛋白。這些重要的蛋白質(zhì)在有或沒有特定的小分子協(xié)同調(diào)節(jié)因子（配體）的情況下起作用，控制基因組DNA活動(dòng)的所有方面，包括基因表達(dá)、DNA復(fù)制、基因表達(dá)和基因表達(dá)，DNA修復(fù)醫(yī)學(xué)組學(xué)正在應(yīng)用其新的熒光分析平臺(tái)開發(fā)體外分析，用于快速、靈敏地定量DNA結(jié)合蛋白及其小分子配體的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一種小分子配體，與MetJ甲硫氨酸阻遏蛋白結(jié)合并共同調(diào)節(jié)其活性。

Mediomics Bridge It®SAM熒光分析方法基于成熟的熒光測(cè)量技術(shù)和新的分析平臺(tái)設(shè)計(jì)的結(jié)合，該平臺(tái)利用DNA結(jié)合蛋白作為其各自小分子共調(diào)節(jié)劑（配體）的生物傳感器。DNA序列特異性甲硫氨酸阻遏蛋白對(duì)其DNA結(jié)合位點(diǎn)的親和力在其配體S-腺苷甲硫氨酸的存在下大大增加。對(duì)于該測(cè)定，MetJ共有序列被分成兩個(gè)大致相等的DNA“半位點(diǎn)"，其中一半片段用熒光素標(biāo)記，另一半片段用Oyster®645熒光團(tuán)標(biāo)記。測(cè)試樣品中存在的SAM的相對(duì)量將影響測(cè)定中DNA-MetJ蛋白復(fù)合物形成的量。當(dāng)這種復(fù)合物形成時(shí)，它使熒光標(biāo)記的DNA半位點(diǎn)非常接近，并導(dǎo)致熒光信號(hào)發(fā)射的可測(cè)量變化（增加），可使用微板讀取器（波長(zhǎng)設(shè)置：

吸收nm；發(fā)射665nm）。然后使用SAM標(biāo)準(zhǔn)曲線確定測(cè)試樣品中的SAM濃度。

Bridge It®SAM熒光分析方法顯示出非常理想的性能特征，包括高（>6:1）信號(hào)與背景（S/B）比、良好的檢測(cè)范圍（~0.4μM–100μM）以及~0.4微米的檢測(cè)靈敏度。該檢測(cè)水平（~0.4μM）可用于定量大多數(shù)感興趣的測(cè)試樣品中的SAM，包括生物液體、細(xì)胞培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)基以及組織和細(xì)胞提取物。這個(gè)化驗(yàn)

可以被修改為使用SAM作為反應(yīng)物或產(chǎn)物的任何酶反應(yīng)的測(cè)定。

測(cè)定試劑盒中包含的試劑量足以使用黑色96孔非結(jié)合表面微孔板進(jìn)行所示數(shù)量的單個(gè)SAM測(cè)量。

將SAM測(cè)定溶液儲(chǔ)存在-80°C下，直至使用，在該溫度下，SAM測(cè)定液將保持其活性長(zhǎng)達(dá)1年。如果-80°C的冷凍柜不可用，則將SAM測(cè)定溶液儲(chǔ)存在-20°C，直到使用，在那里它將保持其活性長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。Bridge It®SAM熒光分析試劑盒的剩余部分可在-20oC下儲(chǔ)存在冰箱中，直至需要使用。僅解凍適當(dāng)數(shù)量的

計(jì)劃實(shí)驗(yàn)所需的試劑管。每管SAM測(cè)定溶液包含足以使用96孔黑色微孔板進(jìn)行十（10）次SAM測(cè)量的試劑。

將SAM測(cè)定溶液在37℃下解凍30分鐘，并在室溫下保存直至使用。任何未使用的試劑可在4°C的冰箱中密封儲(chǔ)存一周。SAM分析試劑盒試劑在-20°C下冷凍保存時(shí)，將保持其活性至少2個(gè)月。