QUANSYSBIO 355149HU說明書

引言

Q-Plex Human Micronutrient v2 (7-Plex)

Q-Plex™ 人體微量營養(yǎng)素（7-復合物）臨界反饋

微量營養(yǎng)素缺乏（MND）會對個人及其后代產(chǎn)生系統(tǒng)性和持久的影響（1）。MND影響全球人口，但對中低收入國家（LMIC）育齡兒童和婦女的影響不成比例。如果不進行治療，MND會顯著降低生活質量并造成致命后果。需要制定公共健康監(jiān)測計劃，以確定面臨風險的人群，并確定要采取的適當干預措施。然而，已經(jīng)表明，此類項目的可持續(xù)性取決于成本、能力發(fā)展和機構基礎的位置（2）。

一些組織試圖提供綜合平臺，以滿足公共健康監(jiān)測項目的需求。通常，只有在地區(qū)或國家以外的測試中心才能使用具有良好特征的方法。這里需要注意的一個重要群體是VitMin實驗室（德國Willst?tt），該實驗室通常被認為是通過傳統(tǒng)的夾心ELISA方法測量微量營養(yǎng)素的金標準（3）。然而，這種偏好造成了對服務的高需求，并在不同情況下對研究人員造成了與出口相關的障礙（4）。因此，需要一種價格合理、準確且易于實施和使用的分析方法，以滿足LMICs公共健康監(jiān)測項目的需要。

多重微量營養(yǎng)素評估工具（MMAT）最初于2014年推出，是PATH（美國華盛頓州西雅圖）和Quansys Biosciences（美國猶他州洛根）合作開發(fā)的一種多重ELISA。MMAT在正式發(fā)布后更名為Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（5-Plex）。該分析同時評估了5種分析物的水平，包括鐵蛋白、C反應蛋白（CRP）、α-1-酸性糖蛋白（AGP）、可溶性轉鐵蛋白受體（sTfR）和視黃醇結合蛋白4（RBP4）（5）。與傳統(tǒng)ELISA相比，多重ELISA允許從小血樣中生成和收集更多數(shù)據(jù)。此外，與其他多重ELISA平臺不同，如Luminex和MagPix平臺依賴于可能需要專門設施、培訓和服務的流體系統(tǒng)，Q-Plex試劑盒是根據(jù)傳統(tǒng)ELISA協(xié)議設計和遵循的，只需要相對較少的培訓和專門設備。2017年，分析物小組擴大到包括甲狀腺球蛋白（Tg）和組氨酸豐富蛋白II（HRP2），并更名為Q-Plex人類微量營養(yǎng)素（7-Plex）。這拓寬了分析的能力，使其能夠指示碘的狀態(tài)以及患者目前或最近是否感染了惡性瘧原蟲瘧疾（6,7）。此外，確定使用干血點（DBS）作為樣本類型適用于除鐵蛋白外的所有分析物，鐵蛋白在DBS中反映了血清鐵蛋白與溶解紅細胞的細胞內(nèi)鐵蛋白的混合物，混淆了測試結果（8）。

Quansys Biosciences和PATH以外的實驗室對Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）分析進行了廣泛測試，以在現(xiàn)場廣泛部署之前驗證其性能。外部測試表明許多分析物具有良好的相關性，但確定了與更成熟的方法有關的數(shù)據(jù)相關性問題。一項研究表明，從Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）和維生素產(chǎn)生的數(shù)據(jù)之間存在差異

尤其是sTfR、AGP、RBP4之間的差異，以及鐵蛋白分析的敏感性（4）。CDC完成的第二項研究將Quansys ferritin、sTfR、CRP和AGP與羅氏臨床分析儀的ferritin、sTfR、CRP和AGP進行了比較，并使用視黃醇HPLC參考標準對其中一些結果進行了支持，強調了sTfR和RBP4的可變性（9）。

CDC正在進行外部質量保證工作，以提高錳分析的標準化，為驗證外部發(fā)現(xiàn)提供了一個支持平臺。從CDC方法性能認證計劃中獲得40份樣本，由羅氏臨床分析儀對CRP、sTfR、鐵蛋白、AGP和視黃醇HPLC進行10次單獨運行，一式兩份。在Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）上生成的這些樣品的數(shù)據(jù)與CDC的鐵蛋白和CRP參考值（圖1-2）很好地一致，但分析結果顯示一致性較差

對于AGP、sTfR和RBP4，與先前研究的結果相關（圖3-5）。此處未顯示甲狀腺球蛋白的數(shù)據(jù)，因為CDC參考樣品尚未對該分析物進行表征。

綜上所述，這些數(shù)據(jù)和第三方評估提供的反饋明確強調了需要改進的領域，以便MMAT分析成為現(xiàn)有方法的可行替代方法。簡而言之，要點如下：

•鐵蛋白分析的敏感性

•RBP4分析的精度

•sTfR和AGP數(shù)據(jù)與既定方法的相關性

Q-叢™ 人體微量營養(yǎng)素（7倍）數(shù)據(jù)

為了解決需要改進的領域，Quansys改進了工具，以生成Q-Plex人體微量營養(yǎng)素v2（7-Plex）。具體而言，新的捕獲抗體提高了鐵蛋白分析的靈敏度，同時仍保持與參考樣品的相關性（圖1）。這改變了分析范圍，以確保樣品分布更一致地落在可量化范圍的中間，從而對鐵蛋白含量較低的樣品進行更精確的測量。（圖6A）。

觀察到的RBP4缺乏精確度被確定為與RBP4樣本值低于或高于分析定量上限有關。為了應對這一挑戰(zhàn)，對分析進行了重新校準，以確保所有內(nèi)源性樣本，而不僅僅是來自缺乏維生sA的個體的樣本，都落入標準曲線的線性部分，其中定量更精確（圖6B）。這是由于鐵蛋白分析的靈敏度提高，使樣品的工作稀釋度從1:10增加到1:40。此外，使用CDC的血清微量營養(yǎng)素性能驗證項目樣本進行的測試數(shù)據(jù)顯示，RBP4和視黃醇水平之間存在很強的相關性（R2=0.75）（圖5）。

在RBP4和鐵蛋白的1:40樣品稀釋法下，AGP、CRP、Tg、HRP2和sTfR均再次優(yōu)化。

CRP和Tg的性能特征沒有隨新的樣品稀釋因子發(fā)生顯著變化（圖2），然而，AGP結果表明，優(yōu)化改進了與參考值的相關性，同時也使數(shù)據(jù)點偏離了量化限制（圖6C-D）。為了改進sTfR分析，確定了新的捕獲和檢測抗體集，并用于改善與CDC參考值的相關性（圖4）。

改進微量營養(yǎng)素測定的最后一步是消除技術障礙，在使用相同的試劑盒和材料處理樣品時，這可能會導致實驗室之間的差異。在整個方案的培養(yǎng)步驟中，無需搖床即可優(yōu)化分析。這不僅減輕了設備要求的負擔，而且消除了因以可變速度運行的平板振動篩之間的差異而產(chǎn)生的任何變化。此外，Quansys還提供了對照樣品，以確保分析性能。

總之，新優(yōu)化的Q-Plex人體微量營養(yǎng)素v2（7-Plex）分析通過以下方式處理反饋：

•提高鐵蛋白分析的靈敏度

•提高RBP4分析的精確度

•改進sTfR和AGP數(shù)據(jù)與既定方法的相關性

•不再需要平板振動篩