rokazyme生產(chǎn)和銷售用于研究，診斷和工業(yè)測(cè)試目的的新型酶。該公司成立于2006年，是冰島生物技術(shù)公司Prokaria的副產(chǎn)品，該公司后來(lái)合并為非營(yíng)利性國(guó)有企業(yè)Matis。Prokazyme基于二十年的地?zé)嵘锟碧剑⑸锘蚪M學(xué)和酶發(fā)現(xiàn)。Prokazyme（作為中小企業(yè)）與馬蒂斯組成了一個(gè)研究聯(lián)盟，并共同參與了由歐盟資助的一些研究項(xiàng)目。持續(xù)的研發(fā)和與Matis的戰(zhàn)略聯(lián)盟使Prokazyme有機(jī)會(huì)開發(fā)大量不斷增長(zhǎng)的嗜熱細(xì)菌和病毒基因數(shù)據(jù)庫(kù)，并繼續(xù)開發(fā)新的*酶產(chǎn)品。

Rma DNA ligase from Rhodothermus marinus

來(lái)自Rhodothermus marinus的Rma DNA連接酶

熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶，寬溫度范圍為5-65°C。 

來(lái)自Rhodothermus marinus的 DNA連接酶是一種熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶，其寬溫度范圍為5-65℃。所述enzym ë催化高保真DNA連接并適合于各種應(yīng)用，包括基因合成。

產(chǎn)品Dlig120 Rma DNA連接酶有500個(gè)單位和2000個(gè)單位以及10x反應(yīng)緩沖液。

產(chǎn)品：Dlig120S | DNA連接酶500單位| 價(jià)格：220.00 EUR

產(chǎn)品：Dlig120L | DNA連接酶2000單位| 價(jià)格：320.00 EUR

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產(chǎn)品描述

介紹：

Rma DNA連接酶催化雙鏈DNA結(jié)構(gòu)中相鄰3'-羥基和5'-磷酸末端的NAD依賴性連接。與T4 DNA連接酶相反，Rma DNA連接酶對(duì)平端DNA的片段沒(méi)有可檢測(cè)的活性。與T4 DNA連接酶不同，Rma DNA連接酶在宜溫度條件下僅顯示小的連接活性，對(duì)于4bp以及2bp的共同末端。Rma DNA連接酶對(duì)RNA靶標(biāo)沒(méi)有活性。從攜帶質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中分離和純化Rma DNA連接酶，所述質(zhì)粒具有來(lái)自冰島分離的嗜熱細(xì)菌Rhodother-mus marinus的克隆DNA連接酶基因（1,2）。Rma連接酶的半衰期在91℃下為7分鐘（2）。該酶具有廣泛的反應(yīng)溫度，宜活性約為55℃。

應(yīng)用：

Tsc DNA連接酶是需要高溫，高嚴(yán)格連接雙鏈DNA的應(yīng)用的理想酶.Tsc DNA連接酶可用于：

• 基因合成（12）來(lái)自重疊的寡核苷酸。

儲(chǔ)存：
儲(chǔ)存和稀釋緩沖液：20 mM Tris-HCl，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，0.1％Triton X-100（v / v），1 mM二硫蘇糖醇（DTT），50％甘油（v / v），pH 7,6（25℃）。當(dāng)在-15°C至-25°C下儲(chǔ)存時(shí)，Rma DNA連接酶是穩(wěn)定的。

反應(yīng)條件：
1×反應(yīng)緩沖液（10x供應(yīng)）20mM Tris-HCl，20mM KCl，10mM MgCl 2,0,1％Nonidet P40（v / v），0.5mM NAD，1mM DTT，pH 7 ，5（25°C）。

濃度和單位定義
濃度10 U /μl。一個(gè)單位的Rma DNA連接酶催化在45℃下1分鐘內(nèi)1μgBstEII消化的λDNA的50％cos位點(diǎn)的連接。

應(yīng)用方案：活性測(cè)定： 單位定義的酶測(cè)定法是用BstII消化的λDNA的cos位點(diǎn)的連接。

在45°C孵育1-15分鐘。在干冰/乙醇浴中進(jìn)行反應(yīng)。在65℃下孵育10分鐘，然后在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行分析（未連接的cos位點(diǎn)熔化）

通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色測(cè)定結(jié)果。

質(zhì)量控制：

質(zhì)量控制：
如下所述，測(cè)定每批Tsc DNA連接酶的活性和污染活性。

缺乏DNA核酸內(nèi)切酶：

• 將0.25μg超螺旋pBR322 DNA與增加量的Tsc DNA連接酶在25μl反應(yīng)中于37℃溫育16小時(shí)。> 100U的Tsc DNA連接酶顯示pBR322 DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)沒(méi)有松弛。

• 在25μl反應(yīng)中，在37℃和64℃下，用Tsc DNA連接酶加入0.25μgλ-DNA Eco RI / HindIII片段16小時(shí)。100U Tsc DNA連接酶未顯示條帶圖案的改變。

不含核酸外切酶：將增加量的Tsc DNA連接酶在含有[3H] - 標(biāo)記的DNA的50μl測(cè)試緩沖液中于37℃和64℃溫育4小時(shí)。顯示無(wú)外切核酸酶活性的酶量> 100U。

缺乏Rnases：
來(lái)自Ambion的RNaseAlertTM實(shí)驗(yàn)室測(cè)試試劑盒（目錄號(hào)1964）用于根據(jù)制造商的方案檢測(cè)RNase活性。在1小時(shí)后37℃孵育Tsc DNA連接酶的XU后未檢測(cè)到RNase活性。

參考文獻(xiàn)：

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• Housby JN，et al。2001.肛門。生物化學(xué)。302：88-94
• Sutton JR，et al。1992.轉(zhuǎn)基因研究1：228

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