| IL28B RealFast™檢測 |  | 7-200 7-203 |
一。預(yù)期用途
IL28B RealFast™檢測是一種快速、準(zhǔn)確的實(shí)時(shí)PCR檢測方法，用于檢測
人干擾素lambda 4（ifnl4）基因/假基因，位于白細(xì)胞介素28b（il28b）基因上游。遺傳
有助于預(yù)測丙型肝炎病毒（HCV）感染患者的治療反應(yīng)，這些患者正在考慮接受聚乙二醇干擾素/利巴韋林（PEGIFN/RBV）治療。有利tt等位基因的純合攜帶者傾向于高達(dá)3倍
持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答（SVR）比∏G等位基因攜帶者。在人類DNA提取液中，定性分析鑒別出
可能與高（TT/TT）或低（TT/△G和△G/△G）治療相關(guān)的IFNL4 TT>ΔG基因型——誘導(dǎo)或自發(fā)清除HCV。
參考序列：HGVS:NG U 042193.1:G.1457 U 1458;Delaainsc；NCBI DBSNP:RS368234815。
2.介紹
慢性丙型肝炎病毒感染影響了大約3%的世界人口，是肝硬化、肝癌和肝移植的主要原因。
推薦的pegifn/rbv標(biāo)準(zhǔn)療法的成功與否取決于病毒和宿主因素?；颊吒腥静焕?/p>
1型或4型hcv的svr低于2型或3型hcv感染者。影響治療反應(yīng)的宿主因素包括年齡、性別
影響抗病毒活性的種族和遺傳多態(tài)性。ifnl4 rs368234815 t t>.-g變體與rs12979860 c>t緊密相關(guān)，
長期治療成功的標(biāo)志。幾項(xiàng)研究表明rs368234815是il28b的功能變異
mrna調(diào)節(jié)，與rs12979860相比，作為svr和hcv清除的更好預(yù)測因子，尤其是在非洲患者中
祖先。IFNL4基因型TT/TT有利于HCV患者自發(fā)和治療誘導(dǎo)的病毒清除，主要是在那些
感染1型或4型。
三。套件內(nèi)含物100/32 RXN
realfast™2x基因分型混合物1瓶白色瓶蓋1000/320微升
IL28B分析混合物1瓶紫色瓶蓋550/550微升
IL28B TT/TT對(duì)照品1瓶綠蓋75/75微升
IL28B∏g/∏g-對(duì)照品1瓶紅蓋75/75微升
該試劑盒包含終體積為20微升的100/32反應(yīng)試劑
每一個(gè)。
realfast™2x基因分型混合物包括hotstart taq
優(yōu)化緩沖體系中的dna聚合酶和dntps。IL28B分析混合物由IFNL4基因特異性引物和兩個(gè)等位基因特異性雙標(biāo)記水解探針組成。
試劑盒中提供了代表il28b tt/tt和∏g/∏g基因型的對(duì)照品。
四。儲(chǔ)存和穩(wěn)定性
IL28B RealFast™分析用冷卻塊裝運(yùn)。到達(dá)后，將試劑盒保存在-20°C?；蛘?，將試劑盒保存在2到8°C，以便在
一個(gè)月。該試劑盒可承受20次冷凍/解凍循環(huán)，且無活性損失。避免長時(shí)間暴露在強(qiáng)光下。如果存儲(chǔ)正確，
試劑盒將保持完整的活性，直到標(biāo)簽上標(biāo)明的有效期為止。5個(gè)。產(chǎn)品描述
5.1。試驗(yàn)原理
該試驗(yàn)基于熒光5'核酸酶分析，也稱為Taqman®分析。每個(gè)反應(yīng)都包含一對(duì)基因特異性引物
它放大了ifnl4基因的110bp片段，以及兩個(gè)雙標(biāo)記的等位基因特異性水解探針
擴(kuò)增片段的序列。5’熒光探針和3’-猝滅染料在完整探針上的接近阻止了記者
從熒光中。在聚合酶鏈反應(yīng)的延伸階段，taq dna聚合酶的5'-3'外切酶活性能裂解5'-熒光
雜交探測器的記者。熒光團(tuán)與猝滅染料的物理分離實(shí)時(shí)產(chǎn)生熒光信號(hào)，熒光信號(hào)與累積的pcr產(chǎn)物成正比。
在純合tt/tt樣本中，hex標(biāo)記的tt探針與基因片段的互補(bǔ)鏈雜交。強(qiáng)壯的
在hex通道（556nm）中檢測到熒光信號(hào)，在fam通道（520nm）中沒有或僅檢測到基線信號(hào)。反之亦然，在
純合子∏g/∏g樣本fam標(biāo)記的∏g探針與基因片段結(jié)合。fam中檢測到強(qiáng)熒光信號(hào)
在十六進(jìn)制通道中沒有或只有一個(gè)基線信號(hào)。在雜合子樣本中（TT/△G），兩個(gè)探針都與擴(kuò)增子結(jié)合，并且
在兩個(gè)通道中生成中間信號(hào)。
5.2。實(shí)時(shí)PCR儀器兼容性
IL28B RealFast™分析經(jīng)驗(yàn)證可與AB 7500快速儀器一起使用。
該試劑盒與能夠記錄FAM和HEX熒光的各種通用實(shí)時(shí)PCR儀器兼容：
使用AB StepOne™時(shí)，將被動(dòng)參考染料設(shè)置為“Rox”！提供的套件不含ROX。用于需要高rox的實(shí)時(shí)pcr儀器，用于數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)化（例如
Biosystems®儀器：StepOne™，7300，7900/7900ht），在2X基因分型混合物中添加終濃度為1μm的RoX。
5.3條。分析性能規(guī)范
il28b realfast™分析和檢測高度連鎖rs12979860 c>t多態(tài)性的參考試劑盒顯示99,4%
84份樣品基因分型結(jié)果的一致性。
在168個(gè)等位基因中，IL28B realfast™分析鑒定出113個(gè)有利TT和55個(gè)不利∏G等位基因，而參考試劑盒鑒定出
114個(gè)有利c等位基因和54個(gè)不利t等位基因。對(duì)一個(gè)不一致的樣本進(jìn)行測序后發(fā)現(xiàn)，存在∏g等位基因，但不存在
與一條染色體上的rs12979860 t等位基因相關(guān)。
IL28B RealFast™檢測的敏感性和特異性分別顯示真陽性和真陰性。
檢測限：0.2ng基因組dna（每次反應(yīng)）。建議DNA濃度：2至20 ng/μL基因組DNA。6.需要但未提供的材料
帶FAM（520 nm）和HEX（556 nm）過濾器的實(shí)時(shí)PCR儀器，儀器兼容的反應(yīng)容器，一次性無粉末
手套、渦流器、2.0毫升試管的微型離心機(jī)、試管架、一套校準(zhǔn)的微量移液管（0.5–1000微升）、帶氣溶膠屏障的無菌針頭
過濾器，分子級(jí)水，DNA提取系統(tǒng)，冷凍柜，生物危害廢物容器。
