Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒，以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎(chǔ)研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，我們還在產(chǎn)品線中為微管，微管蛋白，運(yùn)動(dòng)蛋白，小G蛋白效應(yīng)物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。
Cytoskeleton的Biochem Kits™是用于分析細(xì)胞骨架生物化學(xué)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的不同方面的綜合試劑盒。這些工具包通常構(gòu)成出版物中圖形的基礎(chǔ)，請(qǐng)查看引文標(biāo)簽中的示例。該試劑盒附帶了分析所需的所有試劑以及如何使用它們的詳細(xì)說明，因此您可以在準(zhǔn)備好試劑盒后立即進(jìn)行分析！
許多出版物引用了在論文的材料和方法部分中使用Cytoskeleton的試劑盒。通常，引文與圖形或圖像形式的特定結(jié)果相關(guān)聯(lián)，這有助于您，作者，您的發(fā)現(xiàn)。這表明套件可在短時(shí)間內(nèi)生成出版物質(zhì)量數(shù)據(jù)，從而有助于提高工作效率。肌動(dòng)蛋白試劑盒的引用示例如下所示。個(gè)別產(chǎn)品頁面上提供了更多引文。??
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK001） |
Takeshita，N.，Ohta，A。和Horiuchi，H。（2005）。CsmA是一種具有肌球蛋白運(yùn)動(dòng)樣結(jié)構(gòu)域的V類幾丁質(zhì)合酶，通過與構(gòu)巢曲霉中肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的直接相互作用進(jìn)行定位。摩爾。生物學(xué)。細(xì)胞16,1961-1970。 |
Banerjee，J。和Wedegaertner，PB（2004）。鑒定PDZ-RhoGEF中的新序列，其介導(dǎo)與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的相互作用。摩爾。生物學(xué)。Cell 15,1760-1775。 |
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肌動(dòng)蛋白聚合生物化學(xué)試劑盒（熒光形式）：兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK003） |
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肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：人血小板肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK013） |
Gohla，A.，Birkenfeld，J。和Bokoch，GM（2005）。Chronophin是一種新型HAD型絲氨酸蛋白磷酸酶，可調(diào)節(jié)cofilin依賴性肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)。納特。細(xì)胞生物學(xué)。7,21-29。 |
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G-Actin / F-actin體內(nèi)檢測Biochem試劑盒（目錄號(hào)BK037） |
Rapier等，2010。癌細(xì)胞Int。10,24 |
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問題1：哪種試劑盒是檢測肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的*選擇？
答案1： Cytoskeleton有兩個(gè)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析試劑盒，是識(shí)別和表征肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的理想選擇。一個(gè)試劑盒使用肌肉肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK001），另一個(gè)試劑盒使用非肌肉肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK013）。兩種測定均利用共沉淀來鑒定蛋白質(zhì)是否與單體或絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合以及蛋白質(zhì)是否具有F-肌動(dòng)蛋白切斷或成束特性。為了檢查與肌動(dòng)蛋白單體結(jié)合的化合物或蛋白質(zhì)，含有鏈霉抗生物素蛋白包被的孔的96孔板可以與生物素化肌動(dòng)蛋白復(fù)合（Cat。＃AB07）產(chǎn)生肌動(dòng)蛋白單體捕獲蛋白。然后可以將化合物，蛋白質(zhì)或提取物與捕獲蛋白一起溫育，并且可以通過HRP檢測系統(tǒng)使用針對(duì)目標(biāo)化合物或蛋白質(zhì)的抗體（或標(biāo)記可以與測試蛋白綴合）來顯現(xiàn)結(jié)合。請(qǐng)記住，緩沖液組成也很重要，因?yàn)樗枰望}（約50 mM）并含有CaCl 2（或其他二價(jià)陽離子）和ATP以維持肌動(dòng)蛋白單體的穩(wěn)定性。有關(guān)兼容緩沖液的示例，請(qǐng)參閱我們的一般肌動(dòng)蛋白緩沖液配方（Cat。＃BSA01-001）?；蛘?，可以用GST標(biāo)記感興趣的蛋白質(zhì)（避免還原劑）并與板綴合，然后與生物素化的肌動(dòng)蛋白一起溫育，并用HRP綴合的鏈霉抗生物素蛋白顯現(xiàn)。
問題2：當(dāng)我對(duì)感興趣的肌動(dòng)蛋白沒有可用的芘結(jié)合物（例如心臟，平滑肌或細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白）時(shí)，如何用芘測定法測量肌動(dòng)蛋白聚合？
答案2： 為了檢查未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白的聚合，請(qǐng)點(diǎn)擊此處查看使用過量未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白（心肌，平滑肌或細(xì)胞質(zhì)）加10％芘標(biāo)記肌肉肌動(dòng)蛋白的聚合方案。芘肌肉肌動(dòng)蛋白不會(huì)以該測定中使用的濃度自身聚合，因此反應(yīng)依賴于未標(biāo)記的非肌肉肌動(dòng)蛋白形成F-肌動(dòng)蛋白。以這種方式，芘標(biāo)記的肌肉肌動(dòng)蛋白被吸收并聚合以充當(dāng)用于聚合未標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白的報(bào)道分子，其以更高的濃度存在。
問題3：如何從細(xì)胞或組織提取物中測量G-和F-肌動(dòng)蛋白？
答案3： 確定細(xì)胞或組織樣本中游離球狀肌動(dòng)蛋白（G-肌動(dòng)蛋白）含量與絲狀肌動(dòng)蛋白（F-肌動(dòng)蛋白）含量的可重復(fù)和準(zhǔn)確的方法是使用F-肌動(dòng)蛋白和G-肌動(dòng)蛋白部分的Western印跡定量。 。一般方法是使F-肌動(dòng)蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細(xì)胞或組織均質(zhì)化，然后高速離心以將F-肌動(dòng)蛋白與G-肌動(dòng)蛋白池分離。然后通過SDS-PAGE分離級(jí)分，并通過Western印跡定量肌動(dòng)蛋白。終結(jié)果給出了準(zhǔn)確的方法來確定摻入細(xì)胞骨架的F-肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的G-肌動(dòng)蛋白的比例。細(xì)胞骨架提供了一種簡單易用的選擇，可用G-肌動(dòng)蛋白/ F-肌動(dòng)蛋白體內(nèi)檢測試劑盒（Cat。＃BK037）定量G-和F-肌動(dòng)蛋白。該試劑盒提供了在不同處理?xiàng)l件下定量細(xì)胞或組織樣品中單體和聚合肌動(dòng)蛋白水平的所有必需試劑。將樣品離心，然后將沉淀（F-肌動(dòng)蛋白）和上清液（G-肌動(dòng)蛋白）溶解于SDS上樣緩沖液中并通過Western印跡處理。
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30-100 assays (Cat. # BK037)
窗體底端
產(chǎn)品用途包括
引言
確定細(xì)胞群中絲狀肌動(dòng)蛋白（F-肌動(dòng)蛋白）含量與游離球狀肌動(dòng)蛋白（G-肌動(dòng)蛋白）含量的可重復(fù)和準(zhǔn)確的方法是使用F-actin和G-actin細(xì)胞的Western印跡定量分?jǐn)?shù)（1-4）。一般方法是使F-肌動(dòng)蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細(xì)胞均質(zhì)化，然后離心以將F-肌動(dòng)蛋白與G-肌動(dòng)蛋白池分離。然后通過SDS-PAGE分離級(jí)分，并通過Western印跡定量肌動(dòng)蛋白。終結(jié)果給出了準(zhǔn)確的方法來確定摻入細(xì)胞骨架的F-肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的G-肌動(dòng)蛋白的比例。該試劑盒包含進(jìn)行該試驗(yàn)所需的所有試劑。
試劑盒內(nèi)容
該試劑盒包含足夠的材料，可根據(jù)分析設(shè)置進(jìn)行30-100次分析，并包含陽性和陰性對(duì)照試劑。包括以下組件：
需要的設(shè)備
實(shí)施例結(jié)果
使用G-肌動(dòng)蛋白/ F-肌動(dòng)蛋白體內(nèi)測定試劑盒，在用肌動(dòng)蛋白聚合藥物jasplakinolide處理的Swiss 3T3細(xì)胞中研究了G-肌動(dòng)蛋白和F-肌動(dòng)蛋白量的變化。在未經(jīng)處理的瑞士3T3細(xì)胞中，80％的肌動(dòng)蛋白是可溶性G-肌動(dòng)蛋白，并且在上清液部分中發(fā)現(xiàn)，20％的肌動(dòng)蛋白是絲狀F-肌動(dòng)蛋白并且在沉淀部分中發(fā)現(xiàn)。在用jasplakinolide處理的Swiss 3T3細(xì)胞中，80％的肌動(dòng)蛋白重組成F-肌動(dòng)蛋白并且在沉淀部分中發(fā)現(xiàn)（圖1）。
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| 圖1.用jasplakinolide處理后瑞士3T3細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白的重組。瑞士3T3細(xì)胞用jasplakinolide（Jaspl）處理或不處理（Untr），并使用BK037測定G-肌動(dòng)蛋白（G）和F-肌動(dòng)蛋白（F）含量。用jasplakinolide治療導(dǎo)致F-肌動(dòng)蛋白的有效積累。 |
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問題1：在哪個(gè)步驟可以停止檢測？
答案1： 直到在37℃下旋轉(zhuǎn)100,000xg 1小時(shí)后才能停止測定。在高速離心后，可將上清液（G-肌動(dòng)蛋白）與SDS上樣緩沖液混合并冷凍備用。應(yīng)使用解聚劑和水重懸沉淀（F-肌動(dòng)蛋白），然后與SDS上樣緩沖液混合并冷凍備用。在冷凍時(shí)，F(xiàn)-肌動(dòng)蛋白解聚，因此在冷凍樣品之前必須將F-肌動(dòng)蛋白與G-肌動(dòng)蛋白分離以分離樣品以準(zhǔn)確測量F-肌動(dòng)蛋白和G-肌動(dòng)蛋白比率。
問題2：這種檢測有多敏感？
答案2： 該檢測方法可以檢測到G-肌動(dòng)蛋白與F-肌動(dòng)蛋白比例的15％變化。每個(gè)條件應(yīng)一式兩份進(jìn)行并重復(fù)幾次，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)之間的測定再現(xiàn)性可以變化10-20％。
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參考
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
BK165-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK165 | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK163-S | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK163 | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK160-S | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK160 | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK162-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK162 | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK161-S | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK161 | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
AAC04-Beads | Acetyl-Lysine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
APY03-Beads | Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM11-Beads | SUMOylation 1 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM24-Beads | SUMOylation 2/3 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
UBA01-Beads | Ubiquitination Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
CIG02-Beads | Acetyl-Lysine Control Beads | ea | cytoskeleton |
CIG03-Beads | SUMO1 IP Control Beads | ea | cytoskeleton |
CIG01-Beads | IgG Control Beads | ea | cytoskeleton |
CUB02-Beads | Ubiquitination Control Beads | ea | cytoskeleton |
BLR01 | BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit | ea | cytoskeleton |
BLR02 | BlastR™ Rapid Filtration Kit | ea | cytoskeleton |
AAC02 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1) | ea | cytoskeleton |
AAC03 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC03-HRP | Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC01 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20) | ea | cytoskeleton |
APY03 | Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
APY03-HRP | Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
ASM01 | SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16) | ea | cytoskeleton |
ASM24 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2) | ea | cytoskeleton |
ASM23 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
ASM23-HRP | SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
AUB01 | Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
AUB01-HRP | Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
PHDG1 | Acti-stain 488 phalloidin | ea | cytoskeleton |
PHDH1 | Acti-stain 555 phalloidin | ea | cytoskeleton |
PHDN1 | Acti-stain 670 phalloidin | ea | cytoskeleton |
BK001 | Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
BK003 | Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
AKL95 | Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AD99 | Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
AS99 | Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle | ea | cytoskeleton |
AKL99 | Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AKF99 | Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AP05 | Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
APHR | Actin protein (rhodamine): human platelet | ea | cytoskeleton |
AR05 | Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AT01 | Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
RP01P | Arp2/3 protein complex: porcine brain | ea | cytoskeleton |
CS-TFC01 | Cardiac Thin Filament Complex (CTFC) | ea | cytoskeleton |
CF01 | Cofilin 1 protein: human recombinant | ea | cytoskeleton |
HPG6 | Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant | ea | cytoskeleton |
MH01 | Heavy meromyosin protein | ea | cytoskeleton |
CS-MH03 | Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment) | ea | cytoskeleton |
CS-MYS03 | Myosin - cardiac S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS04 | Myosin - skeletal muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS05 | Myosin - smooth muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
MY02 | Myosin II protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
MY03 | Myosin protein: bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
PR02 | Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant | ea | cytoskeleton |
PHDR1 | Rhodamine Phalloidin | ea | cytoskeleton |
CY-SC001 | SiR-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
CY-SC013 | SiR700-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
VCG03 | WASP protein VCA domain: GST tagged: human | ea | cytoskeleton |
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